在人類心臟急性心肌梗死后，數百萬個心肌細胞丟失并被纖維化疤痕所取代。雖然這種纖維化疤痕對于維持心臟的結構完整性是必要的，但它的存在與收縮質量的減少相結合，最終會導致心力衰竭。仍然迫切需要開發治療策略來替代丟失的心臟組織。非哺乳動物脊椎動物生物，如硬骨斑馬魚，具有在多種類型損傷后再生丟失的心肌細胞的能力。值得注意的是，斑馬魚可以在冷凍損傷后再生心臟，冷凍損傷是一種損傷模型，其中放置在心臟上的液氮冷卻探針會導致細胞死亡、炎癥反應的激活和含有纖維化膠原蛋白的疤痕沉積，類似于人類心臟中的心肌梗塞。雖然過去二十年的研究工作使我們對心臟再生機制的了解大大增加，但目前尚不清楚傷口邊界的再生心肌細胞如何侵入并最終取代受傷后含有膠原蛋白的疤痕組織。
通過對斑馬魚心臟再生過程中心肌細胞突出到受傷組織中的深入分析。我們表明，傷口邊界的心肌細胞表現出遷移細胞的特征，包括運動絲狀偽足樣延伸到受傷組織中，以及調節肌動蛋白動力學、粘著斑和 ECM 重塑的基因表達程序的上調。此外，我們表明巨噬細胞在邊界區起著重塑 ECM 和促進心肌細胞突出的重要作用。然后我們表明 Mmp14b 是巨噬細胞存在和邊界區 ECM 重塑的重要調節因子，隨后心肌細胞在斑馬魚心臟再生過程中侵入受傷組織。
論文信息：
論文題目：Border-zone cardiomyocytes and macrophages regulate extracellular matrix remodeling to promote cardiomyocyte protrusion during cardiac regeneration
期刊名稱：Nature Communications
時間期卷：16, Article number: 3823 (2025)
在線時間：2025年4月23日
DOI：doi.org/10.1038/s41467-025-59169-4
產品信息：
貨號：CP-005-005
規格：5ml+5ml
品牌：Liposoma
產地：荷蘭
名稱：Clodronate Liposomes and Control Liposomes
辦事處：Target Technology（靶點科技）
氯膦酸鹽脂質體斑馬魚巨噬細胞。斑馬魚心臟冷凍損傷后，多種細胞類型協調對損傷的反應。例如，內皮細胞、心內膜細胞和心外膜細胞已被證明可提供生長因子和信號分子，以促進受傷組織的血運重建和心肌細胞再生。成纖維細胞主要起源于心外膜，已被證明在心臟再生過程中沉積 ECM 以支持心臟，并且對損傷后心肌細胞增殖至關重要。近年來，免疫細胞在促進心臟再生過程中的重要性也得到了認可。特別是，巨噬細胞已被證明在斑馬魚、蠑螈和新生小鼠心臟的損傷再生中起著重要作用。巨噬細胞已被證明直接促進和調節冷凍損傷心臟中瘢痕/ECM 的組成。此外，氯膦酸鹽脂質體給藥（荷蘭Liposoma，清除巨噬細胞）或使用遺傳模型消耗巨噬細胞會導致 CM 增殖和再生心臟新生血管形成缺陷。雖然很明顯，許多（如果不是全部）心肌細胞類型在心臟再生過程中起著至關重要的作用，但它們對冷凍損傷后心肌細胞纖維化組織重新填充的貢獻在很大程度上是未知的。氯膦酸鹽二鈉脂質體清除巨噬細胞在斑馬魚心臟凍傷模型巨噬細胞功能研究，荷蘭Liposoma巨噬細胞清除劑Clodronate Liposomes見刊于Nature Communications：斑馬魚交界區心肌細胞和巨噬細胞調節細胞外基質重塑，促進心臟再生過程中心肌細胞突出。
氯膦酸鹽脂質體巨噬細胞促進斑馬魚心肌凍傷修復模型中巨噬細胞清除解決方案：
注射方式：腹腔注射
注射劑量：10ul
注射時間點：根據實驗目的，建模前或者建模后
實驗數據：
巨噬細胞清除方案
Tg（mpeg：NTR-YFP） 成年魚的腦室受到冷凍損傷。然后將冷凍損傷的魚在冷凍損傷后 4 至 6 天（每天補充）在 5 μm 尼呋匹林醇或 DMSO 對照水浴中孵育。以 7 dpci 提取心臟，并用 GFP 抗體進行免疫染色，以檢查巨噬細胞清除效率和鬼筆環肽染色，以量化如上所述邊界區的 CM 突起。
為了清除駐留的巨噬細胞，在冷凍損傷前 8 天用 10 μl 氯膦酸鹽脂質體 （5 mg/ml） （Liposoma， Amsterdam， The Netherlands） 或 PBS 對 Tg （mpeg1：EGFP） 成年魚進行 IP 注射。如上所述，以 7 或 10 dpci 提取心臟，然后進行冷凍切片、CHP 染色和鬼筆環肽染色。如上所述，對邊界區的 CHP 強度和 CM 突起進行定量。
為了在以后的時間點清除巨噬細胞，在 10 dpci 收集心臟之前，以 3、6 和 9 dpci ip（mpeg1：EGFP）注射 10 μl 氯膦酸鹽脂質體 （5 mg/ml）（Liposoma，阿姆斯特丹，荷蘭）或 PBS 對照脂質體。研究巨噬細胞清除對 CMs 中 mmp14b 過表達的影響，Tg（hsp70l：loxP-EGFP-loxP-mmp14b-P2A-tagBFP）;在冷凍損傷前 1 天和之后每 4 天向成年魚注射氯膦酸鹽脂質體或 PBS 脂質體 Tg（?5.1myl7：CreERT2）。如上所述，進行他莫昔芬/乙醇注射和熱休克以誘導 mmp14b 過表達。以 10 或 21 dpci 提取心臟，然后按上述方式進行冷凍切片和鬼筆環肽或 MHC 染色。如上所述，對邊界區的 CM 突出和 CM 皮質覆蓋進行量化。
